Caragea Alexandru-Mihai
Seria D, grupa 24
RT-PCR
PCR (polymerase chain reaction) este o tehnica folosita pentru a amplifica molecule de ADN, cu ajutorul enzimei mediate termic: ADN polimeraza.
Revers transcription PCR este o tehnica de laborator folosita pentru amplificarea unei portiuni definite de ARN. Initial secventei de ARN se adauga catena de ADN complementara. Apoi, utilizand PCR se amplifica secventa obtinuta de ADN.
Prima data se produce catena complementara de ADN folosind reverse transcriptaza in procesul de reverse transcriptie.Aceasta metoda foloseste poly(A) din ARN care se leaga la poly(T) a ADN ului. Prin enzima reverse transcriptaza, are loc sinteza de ADN complementar.Astfel sunt produse milioane de copii, ARN ul fiind in final degradat, lasand doar ADN-ul complementar.
Revers transcription PCR este o tehnica ce nu trebuie sa fie confundata cu Real time PCR, chiar daca ambele tehnici se prescurteaza in acelasi fel.
Real time PCR este folosita pentru a amplifica si pentru a cuantifica in acelasi timp molecule de ADN. Aceasta permite detectia si cuantificarea unei secvente specifice dintr-o monstra de ADN. Trasatura de baza al acestei tehnici este faptul ca ADN-ul amplificat este in acelasi timp cuantificat, in timp real, la finalul fiecarui ciclu de amplificare.
Frecvent, ambele tehnici mai sus mentionate sunt combinate pentru a cuantifica ARN mesager, permitand cercetatorului sa observe expresia unei gene la un moment dat, intr-o celula sau intr-un tesut.
Dupa translatia ARNm in ribozomi si productia de proteine, cantitatea de ARN pare sa fie corelata cu nivelul de proteine.Pentru a putea cuantifica ARN ul trebuie ca mai intai sa fie transcris in ADN ul complementar(reverse transcription).
Real-time PCR masoara produsul amplificat la finalul fiecarui ciclu PCR.
Datele analizate pe computer calculeaza expresia relativa a unei gene sau numarul de copii de ARNm.
Metoda este folosita pentru detectarea genelor implicate in boli infectioase, cancer si disfunctii genetice. Aceasta ofera o cuantificare sensibila a nivelului de transcriptie al unei gene.
Totodata tehnica poate fi folosita si pentru verificarea modului in care o gena se modifica, cum ar fi in cazul raspunsuli unui tesut sau a unei celule in timpul administrarii unui agent farmaceutic, sau datorita conditiilor de mediu.
