In general, aceasta tehnica este aplicata sectiunilor taiate din tesuturi inghetate. In aceasta maniera, antigenele sensibile la fixatori nu sunt alterate.
Testul direct: anticorpul cuplat cu un marker fluorescent este aplicat peste sectiune. Dupa o perioada de incubare adecvata, anticorpul este spalat. Sectiunea este analizata la un microscop „cu fluorescenta”, dotat cu o sursa de lumina UV. Astfel, tesutul apare negru, iar zonele marcate cu anticorpul respectiv apar colorate in lumina caracteristica fluorocromului respectiv.
Testul indirect: Anticorpul primar este detectat cu ajutorul unui anticorp secundar fluorocromat.
Testul indirect amplificat de complement: In etapa a II-a, este adaugat complement proaspat si acesta este legat in jurul situsului de legare al anticorpului. O singura molecula de anticorp poate determina legarea a multor molecule de C3b. Acestea sunt ulterior vizualizate cu ajutorul anticorpilor anti-C3b fluorocromati.
