Reverse transcription PCR & Real time PCR

Reverse transcription PCR & Real time PCR

Comentariile sunt închise pentru Reverse transcription PCR & Real time PCR

                                                        Trifescu Gabriela-Cristina

                                                                   Seria D, gr. 24

 

Reverse transcription PCR & Real time PCR

 

 

Reverse transcription PCR

 

            Este o metoda prin care se realizeaza amplificarea unei portiuni din ARN. Initial se realizeaza o reverse-transcriptie a ARN ului pe molecula complementara de

ADN dupa care se practica o amplificare ADN-ului prin intermediul PCR (polymerase chain reaction).

Prima data se produce catena complementara de ADN folosind reverse transcriptaza in procesul de reverse transcriptie.Aceasta metoda foloseste poly(A) din ARN care se leaga la poly(T) a ADN ului. Prin enzima reverse transcriptaza, are loc sinteza de ADN complementar.Astfel sunt produse milioane de copii, ARN ul fiind in final degradat, lasand doar ADN-ul complementar.

Aceasta tehnica poate fi folosita in diagnosticul bolilor genetice determinand cantitativ expresia unei anumite gene. Mai departe se foloseste tehnica Northern Blot.

 

Real time PCR

 

Aceasta tehnica se foloseste pentru amplificarea si cuantificarea unei anumite molecule de ADN. Astfel molecula este detectata si cuantificata.Se folosesc principii PCR care subliniaza faptul ca orice molecula de ADN amplificata poate fi cuantificata in timp real dupa fiecare ciclu de amplificare.

Aceasta metoda se foloseste impreuna cu prima pentru a putea determina cantitatea de ARNm si pentru a cuantifica o anumita gena dintr-un tesut.

Dupa translatia ARNm in ribozomi si productia de proteine, cantitatea de ARN pare sa fie corelata cu nivelul de proteine.Pentru a putea cuantifica ARN ul trebuie ca mai intai sa fie transcris in ADN ul complementar(reverse transcription).

Real-time PCR masoara produsul amplificat la finalul fiecarui ciclu PCR.Datele analizate pe computer calculeaza expresia relativa a unei gene sau numarul de copii de ARNm.

Metoda este folosita pentru detectarea genelor implicate in boli infectioase, cancer si disfunctii genetice. Aceasta ofera o cuantificare sensibila a nivelului de transcriptie al unei gene.

Totodata tehnica poate fi folosita si pentru verificarea modului in care o gena se modifica, cum ar fi in cazul raspunsuli unui tesut sau a unei celule in timpul administrarii unui agent farmaceutic, sau datorita conditiilor de mediu.

 

Back to Top